条带拖尾
1. 原因:蛋白量太大,一抗浓度偏高和孵育时间太长;
2. 优化:根据实验需求调整上样蛋白量,调整一抗浓度和时间;
3. 解析:这种情况也是常见问题,上样蛋白量一般会做预实验避免;还有容易发生的是一抗浓度太高,作用时间太长引起的,品牌一抗都有稀释比例建议;再个质量好的一抗直接37度孵育半小时就好,无需孵育过夜;再强调一遍洗膜千万不要偷懒,次数和时间洗到位,不要担心把抗体和蛋白洗掉没那么脆弱。
WesternBlot结果条带解析
一. 高背景
1. 原因:封闭不好,Mlkl antibody,一抗浓度高,洗膜时间和次数不够;
2. 优化:增加封闭时间,降低一抗浓度,增加洗膜时间和次数;
3. 解析:高背景是WB中zui常见出现的问题,如果目的条带单一清晰,其他地方出现均一的背景,可以提高吐温比例,洗膜5min*5次或者10min*3次,不要图快肆意改时间和次数;如果出现非均一性背景,实验过程中要保持膜不被干;严格按照实验操作SOP,养成好的实验习惯。
AKT磷酸化降低与内质网应激介导的反复热性惊厥大鼠海马神经元凋亡有关。
TRIB3抗0体orb101550 PubMed 27084529 生命科学
MicroRNA-17通过干扰类风0湿关节0炎滑膜成纤维细胞中TRAF2和cIAP2的关联抑制TNF-α信号。
TRAF2抗0体orb97673 PubMed ID:27534557 Journal of immunology(马里兰州巴尔的摩:1950)
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