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什么是流动相？ 流动相是使分析物通过色谱柱的溶剂。分析物存在于适当的溶剂中，在样品制备后注入色谱系统。该溶剂不被视为新基质，因为它不会干扰分析。可以在样品制备过程中选择分析物的载体（溶剂）的性质，以满足特定要求，例如挥发性和与 HPLC 中流动相的混溶性。在反相色谱柱中，流动相比固定相更具极性。一般来说极性流动相是，因为分离表现出更好的重现性。
分析物在流动相中的溶解度在色谱柱选择中也起着重要作用。对于溶于水或部分水性溶剂的化合物，选择反相 HPLC 不是问题，但对于不溶于极性溶剂的化合物，通常需要使用正相色谱柱。样品极性、固定相极性和流动相极性的评估对于色谱柱的选择也很重要。
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上样也有干法和湿法之分：干法就是把待分离的样品用少量溶剂溶解后，再加入少量硅胶，拌匀后再旋去溶剂。如此得到的粉末再小心加到柱子的顶层。干法上样较麻烦，但可以保证样品层很平整。湿法上样就是用少量溶剂（好就是展开剂，如果展开剂的溶解度不好，则可以用一极性较大的溶剂，但必须少量）将样品溶解后，再用胶头滴管转移得到的溶液，沿着层析柱内壁均匀加入。然后用少量溶剂洗涤后，再加入。湿法较方便，熟手一般采用此法。 上样完毕后，海洋生物类标准品售后代理，接着即用淋洗剂淋洗。淋洗剂一般采用TLC分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂。由于层析柱和薄板的不同，海洋生物类标准品总代理，即使两者使用的硅胶都相同，但是在把TLC分析得到的展开剂用在柱层析时，也显得极性偏大，所以要稀释一倍，江门海洋生物类标准品，但又不能稀释太多，否则成了靠扩散作用来分离，效果也不会好。
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尾峰和前峰：
发现峰不是直线上升和下降，而是开始在前面或后面就形成轻微的倾斜，海洋生物类标准品实验室耗材，则称为前端或尾部。这通常可能是保护柱或分析柱受损或是色谱柱过载。如果有拖尾峰，请先移除保护柱并尝试分析，必要时就需要更换。如果需要恢复或更换分析柱。一定要检查流动相的组成和色谱柱的性能。有前峰的话，请尝试注入更小的体积或稀释样品；如果溶剂有问题请调整溶剂，并使用 50 柱体积的 HPLC 级以标准流速的两倍或三倍冲洗极性键合相柱，然后在开始分析之前使用中等极性溶剂。
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