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液相色谱(Liquid Chromatography, LC)是一种用液体作为流动相的色谱技术,它以化学分子在移动相与定相之间的相互作用力不同而分离化合物。在液相色谱柱分离中,样品通过液体载流剂(流动相)在拥有化学成分不同的柱填充剂(定相)中分离。柱填充剂可以选择性地吸附特定成分,或者在某些情况下,通过反应改变样品分子的表面性质,以分离成分。
具体来说,液相色谱柱分离的原理是样品分子在流动相和定相之间发生不同的相互作用力。这些相互作用力包括静电作用、疏水作用、亲水作用、氢键作用、离子键作用、金属络合作用等。在柱填充剂中,这些样品分子会与柱填充剂中的固定相发生相互作用,被吸附或排斥,使得化合物在柱中的滞留时间不同。因此,化合物分离时,需要根据样品分子的特性和柱填充剂之间的相互作用选择不同的流动相和柱填充剂。
总体而言,液相色谱柱分离是一种在流动相和定相之间通过吸附、反应或其他相互作用力将样品分离的技术。这种分离方法主要用于分析、天然产物分析、食品化学分析、石油化学分析等各种领域。
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色谱柱的活化步骤:
1. 在保持柱湿润的情况下,用(如或)洗涤柱子。例如,在开始使用柱子之前,要用3-5倍柱子体积的洗涤一下柱子。
2. 将纯水通过柱子流通20-30min。这一步可以去除残留的有机化合物和杂质。注意保持柱子湿润。
3. 通过柱子流通一定比例的与水混合物(例如:70%+30%水)。这样可以逐渐增加有机相的浓度,有助于保护柱子不被溶剂冲击。
4. 接着,可以使用一定比例的溶解样品,并以柱洗涤液的方式通过柱子。可以考虑用一些柱洗涤液去除样品残留。
5. 后,洗涤柱子以消除任何残留的溶液,或将柱子存放在一定的缓冲液/中,直到再次使用。
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氢火焰离子化检测器(FID):是根据气体的导电率是与该气体中所含带电离子的浓度呈正比这一事实而设计的。一般情况下,组分蒸汽不导电,但在能源作用下,Phenomenex 纳升级流速消耗品,组分蒸汽可被电离生成带电离子而导电。工作原理:由色谱柱流出的载气(样品)流经温度高达2100℃的氢火焰时,待测有机物组分在火焰中发生离子化作用,使两个电极之间出现一定量的正、负离子,在电场的作用下,正、负离子各被相应电极所收集。当载气中不含待测物时,火焰中离子很少,即基流很小,约10-14A。当待测有机物通过检测器时,火焰中电离的离子增多,电流增大(但很微弱10-8~10-12A)。需经高电阻(108~1011)后得到较大的电压信号,再由放大器放大,才能在记录仪上显示出足够大的色谱峰。该电流的大小,在一定范围内与单位时间内进入检测器的待测组分的质量成正比,所以火焰离子化检测器是质量型检测器。火焰离子化检测器对电离势低于H2的有机物产生响应,而对无机物、久性气体和水基本上无响应,所以火焰离子化检测器只能分析有机物(含碳化合物),不适于分析惰性气体、空气、水、CO、CO2、CS2、NO、SO2及H2S等。
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