把滤膜放在纸巾上于室温晾干后，把滤膜（编号面朝上）放在一张保鲜膜上，并在保鲜膜上作几个不对称的标记，以使滤膜与性自显影片位置对应。
用第二张保鲜膜盖住滤膜。加光片并加上增感屏于-70℃曝光12-16小时。
底片显影后，在底片上贴一张透明硬纸片。在纸上标记阳性杂交信号的位置，同时在不对称分布点的位置上作出标记。可从底片上取下透明纸，通过对比纸上的点与琼脂上的点来鉴定阳性菌落。
DNA 探针为原位杂交提供较高的灵敏度。与RNA探针相比，DNA探针与靶mRNA 分子的杂交强度较弱，因此在杂交后的洗涤中不应使用甲醛。
探针特异性至关重要。如果已知细胞中mRNA或DNA的确切核苷酸序列，则可据此设计高度的互补探针。如果超过 5% 的碱基对不互补，那么探针只能与靶序列发生轻度杂交。这意味着，动物组织原位杂交，探针更容易在洗涤和检测步骤中被洗去，可能无法正确检测。
原位杂交技术的应用领域
原位杂交技术在医学、农业和工业等领域都有广泛的应用。在医学方面，原位杂交技术可用于检测癌细胞、病毒和细菌等致病微生物，帮助医生制定的诊断和方案。在农业方面，原位杂交技术可用于基因定位、品种鉴定和遗传育种等领域，提高农作物的产量和品质。在工业方面，原位杂交技术可用于检测基因工程产品中的外源DNA，保证产品的安全性和稳定性。
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