





原位杂交的应用范围:
①细胞特异性mRNA转录的定位,可用于基因图谱,基因表达和基因组进化的研究;
②感1染组织中病毒DNA/RNA的检测和定位,如EB病毒mRNA、人类乳1头状瘤1病毒和巨细胞病毒DNA的检测;
③癌基因、抑癌基因及各种功能基因在转录水平的表达及其变化的检测;
④基因在染色体上的定位;
⑤检测染色体的变化,如染色体数量异常和染色体易位等;
⑥分裂间期细胞遗传学的研究,如遗传病的产前诊断和某些遗传病基因携带者的确定,某些肿1瘤的诊断和生物学剂量测定等。

杂交结束后,去除杂交液,立即于室温把滤膜放入大体积(300-500ml)的2×SSC和0.1% SDS溶液中,轻轻振摇5分钟,并将滤膜至少翻转一次。重复洗 一次,同时应避免膜干涸。
68℃用300-500ml 1×SSC和0.1% SDS溶液洗膜两次,每次1-1.5小时。此时已可进行自显影。如背景很高或实验要求严格的洗膜条件,可用300-500ml 0.2×SSC和0.1% SDS的溶液于68℃将滤膜浸泡60分钟。
把滤膜放在纸巾上于室温晾干后,把滤膜(编号面朝上)放在一张保鲜膜上,并在保鲜膜上作几个不对称的标记,以使滤膜与性自显影片位置对应。
用第二张保鲜膜盖住滤膜。加X片并加上增感屏于-70℃曝光12-16小时。
底片显影后,在底片上贴一张透明硬纸片。在纸上标记阳性杂交信号的位置,同时在不对称分布点的位置上作出标记。可从底片上取下透明纸,通过对比纸上的点与琼脂上的点来鉴定阳性菌落。
滴加FITC-TSA:滴加FITC-TSA试剂,避光室温反应5min。后TBST洗3次×10min,PBS洗1次×5min。
DAPI复染核:切片滴加DAPI染液,避光孵育8min,冲洗后滴加抗荧光淬灭封片1剂封片。
镜检拍照:切片于尼康正置荧光显微镜下观察并采集图像。(紫外激发波长330-380nm,发射波长420nm,发蓝光;FAM(488)绿光激发波长465-495nm,发射波长515-555 nm,分子病理技术服务,发绿光;CY3红光激发波长510-560,发射波长590nm,发红光。)
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