






生物领域应用原位杂交技术的例子:
基因表达和调控研究:原位杂交技术可以用于研究基因表达的调控机制。例如,可以标记特定基因的探针,检测该基因在不同环境、不同生长条件下的表达情况,ISH,进而研究其表达调控机制。
细胞分化与发育研究:在细胞分化与发育研究中,原位杂交技术常被用于检测和定位特定基因的表达情况,进而了解细胞分化的过程和机制。例如,可以标记与细胞分化相关的基因探针,检测该基因在不同组织、不同发育阶段的表达情况。
原位杂交技术的实验结果
原位杂交技术的实验结果包括阳性信号和阴性信号的判断标准。阳性信号是指探针与目标核酸序列特异性结合形成的双链复合物,在显色反应、荧光染色或性同位素标记下呈现出明显的信号。阴性信号是指探针未与目标核酸序列结合,不呈现任何信号。实验结果的分析需要结合探针的特异性和敏感性、组织或细胞的原始结构以及实验条件等因素综合进行。
菌落的裂解及DNA结合于纤维素滤膜
(1) 在一张保鲜膜上制作一个装有0.5mol/L NaOH的小洼(0.75ml),使菌落面朝上,原位杂交,将滤膜放到小洼上,荧光原位杂交,展平保鲜膜,使滤膜均匀湿润,让滤膜留于原处2-3分钟。
(2) 用干纸巾从滤膜的下方吸干滤膜,用一张新的保鲜膜和新配制的0.5mol/L NaOH重复步骤(1)。
(3) 吸干滤膜,将滤膜转移到新的带有1mol/L Tris·Cl(pH7.4)的保鲜膜洼上。5分钟后吸干滤膜,原位杂交检测,再重复一次该步骤。
(4) 吸干滤膜,把它转移到有1.5mol/L NaCl、0.5mol/L Tris·Cl (pH7.4)的保鲜膜小洼上5分钟后吸干滤膜,转移到一张干的滤纸上,置于室温20-30分钟,使滤膜干燥。
(5) 将滤膜夹在两张干的滤纸之间,在真空烤箱中于80℃干烤2小时,固定DNA。
(6) 将固定在膜上的DNA与32 P标记的RNA进行杂交。
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