原位杂交第三天
1） 用1ml含10％热灭清的MABT溶液置换溶液，放置摇床上25分钟，然后用1mlMABT置换，25分钟，再用1mlMABT溶液置换，一小时以上，后用1mlMABT溶液置换，25分钟。
2） 用1ml 1mM左旋米睉的Staining buffer洗三次，每次放置五分钟。
3）将胚胎转入十六孔板中，吸去staining buffer，加上300ul BM Purple AP Substrate(底物，用之前加5mM左旋米唑)，十六孔板外面包上锡箔纸以避光，避免摇动，室温下显色。
4）每隔一小时观察胚胎是否开始显色
5）将显色完全的胚胎中的底物吸出，原位杂交，用PBST洗两三次后加上4％多聚甲醛固定，拍照。
6）4C冰箱保存。
植物染色体原位杂交技术的应用非常广泛。例如，它可以用来研究植物基因组的结构和功能，染色体荧光原位杂交，包括基因定位、染色体重组、基因表达和基因组演化等方面。此外，该技术还可以用来检测植物中的染色体异常，如染色体缺失、重复和易位等。
植物染色体原位杂交技术的优点在于它可以直接观察到染色体上的目标DNA序列，而不需要进行PCR扩增或测序等操作。此外，该技术还可以同时检测多个目标DNA序列，从而提高检测效率和准确性。
原位杂交是一种非常重要的技术，因为它可以在细胞或组织的自然环境中研究基因表达和调控。它可以帮助科学家们了解基因在特定组织或细胞类型中的作用和功能，以及在疾病发生和发展过程中的变化。此外，原位杂交检测，这项技术还可以用于检测基因变异和染色体异常，以及监测细胞生长和凋亡。
虽然原位杂交是一项非常有用的技术，但它也有一些限制。首先，探针的特异性可能受到干扰，导致错误的结果。其次，探针的数量和位置可能受到细胞或组织中其他成分的影响。此外，荧光原位杂交，这项技术的操作比较繁琐，需要专门的技术和设备，而且需要大量的实验和对照才能获得可靠的结果。
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