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考马斯亮蓝法测定蛋白质含量流程:
该方法用于大多数蛋白质的定量是比较精que的,但不适用于小分子碱性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污剂的浓度超过0.2%影响测定结果。如TritonX-100、SDS、NP-40等。
1.Bradford浓染液的配制:将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50ml 95%乙醇,云南玻璃水亮蓝,加入100ml85%的磷酸,玻璃水亮蓝供应商,然后,用蒸馏水补充至1000ml,此染液放4℃至少6个月保持稳定。
2.标准曲线蛋白质样本的准备:尽量使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品,例如测定抗ti,可用纯化的抗ti作为标准。如果待测样本是未知的,也可用抗ti作为标准蛋白。通常在20ug—150ug/100ul之间绘制标准曲线。
3.将待测样本溶于缓冲溶液中,该缓冲溶液应与制作标准曲线的缓冲溶液相同(hao用PBS)。
4.按1:5用蒸馏水稀释浓染料结合溶液,玻璃水亮蓝价格,如出现沉淀,过滤除去。
5.每个样本加5ml稀释的染料结合溶液,作用5~30min。染液与蛋白质结合后,玻璃水亮蓝批发,将由红色变为蓝色,在595nm波长下测定其吸光度。注意,显色反应不得超过30min.
6.根据标准曲线计算待测样本的浓度。


鉴别试验
(1)本品的水溶液(1+2000),显蓝色。
(2)取本品的水溶液(1+1000)5ml,加盐酸1ml时,变为暗黄绿色。
(3)本品的硫酸溶液(1+100)显暗橙色,取此液2-3滴加水5ml时,显绿色。
(4)本品的水溶液(1+1000)5ml,加(1+5)5ml,在水浴中加热时变为紫红色。
(5)取本品0.1g,加铵溶液(3+2000)200ml 溶解,取此溶液1ml,加铵溶液(3+2000)配至100ml的溶液,在波长628-632nm处有吸收带。
纯度试验
(1)水不容物 小于0.20%。
(2)氯化物、硫酸盐 以总量计,小于4.0%。
(3)重金属 以Pb计,小于20ug/g。
(4 以As2O3计,小于4.0ug/g。
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