






基因法转化洋葱表皮细胞:
分别用70%乙醇和灭菌蒸馏水清洗金粉(直径为1 μm),加入灭菌蒸馏水制成金粉悬浮液,取100 μL 放在含有1.0 cm2 洋葱表皮的玻璃皿中,边振荡边加入10 μL pCambia2301-GaMYB2-GFP质粒,逐步加入40 μL 0.1 mol·L-1 亚精胺和100 μL2.5 mol·L-1 CaCl2,振荡混匀。基因GDS-80轰击时氦气罐的气压为1 300 psi,取10 μL DNA 包裹好的微粒悬浮液加到基因中央,启动子筛选,进行轰击,之后放置25℃避光过夜培养,使用ConfocalLaser激光共聚焦显微镜观察。
为什么有的共定位图片中叶绿体通道是玫红色?
在拟南芥、、玉米、大麦、小麦等材料中,种植培养苗子时是正常接受光照的,叶片中含有大量叶绿体,而叶绿素在640nm左右的激发光下可产生红色的自发荧光。当在这些含叶绿体较多的受体材料中做共定位实验时,共定位marker一般为红色荧光(在560nm左右的激发光下),实验及共聚焦拍摄时两个波长通道的荧光互不影响,但视野下看着比较混淆,尤其叠加后二者不易分清,因此只是在颜色显示上将叶绿体自发荧光设置为玫红色,以显示和共定位marker的区别。

什么是亚细胞定位?首先我们来看什么是亚细胞。细胞是构成生物体的基本结构单位和功能单位,是生命的物质基础。细胞的结构复杂精巧且高度有序,亚细胞是比细胞结构更细化的结构,根据功能和空间分布的不同,细胞内部可以进一步划分为不同的细胞区域或细胞器,即亚细胞,其结构一般只有在电子显微镜(EMs)下才能看到。它们的特点是在细胞内,功能和空间相互隔离,又共同协调维持完整的细胞功能。在一定范围内,亚细胞结构等同于细胞器,不过像细胞膜虽然可以叫亚细胞结构,但不是细胞器。每种亚细胞结构中都存在一组特定的蛋白质,亚细胞结构为这些蛋白质行使功能提供了相对独立的生命活动场所。同时也只有在相同或相近的亚细胞位置上蛋白质间才会有相互作用。

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