






DNA 探针为原位杂交提供较高的灵敏度。与RNA探针相比,原位杂交检测,DNA探针与靶mRNA 分子的杂交强度较弱,因此在杂交后的洗涤中不应使用甲醛。
探针特异性至关重要。如果已知细胞中mRNA或DNA的确切核苷酸序列,则可据此设计高度的互补探针。如果超过 5% 的碱基对不互补,那么探针只能与靶序列发生轻度杂交。这意味着,探针更容易在洗涤和检测步骤中被洗去,原位杂交,可能无法正确检测。
原位杂交技术可以应用于以下场景:
组织中病毒DNA/RNA的检测和定位。例如,可以用于检测EB病毒mRNA、人类状瘤病毒和巨细胞病毒DNA等。
癌基因、抑癌基因及其他各种功能基因在转录水平的表达及其变化的检测。
检测染色体的变化,动物组织原位杂交,如染色体数量异常和染色体易位等。
在植物基因组研究中的应用。例如,通过与特定基因序列的探针进行杂交,可以在植物染色体上定位到目标基因的位置,进而构建遗传图谱,为植物育种和基因组研究提供基础数据。
原位杂交技术的原理是什么?有何用途
原位杂交技术的原理是利用核酸分子单链之间有互补的碱基序列,将有性或非性的外源核酸(即探针)与组织、细胞或染色体上待测DNA或RNA互补配对,结合成专一的核酸杂交分子,经一定的检测手段将待测核酸在组织、细胞或染色体上的位置显示出来。为显示特定的核酸序列要具备3个重要条件:组织、细胞或染色体的固定、具有能与特定片段互补的核苷酸序列(即探针)、有与探针结合的标记物(曾呈奎等2000)。

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