为什么有的基因定位结果与预想的不一致？
对于一个特定的定位载体，只要荧光表达较好，其定位结果是确定的，不会随人为意愿或操作而改变。至于有时候和预想的结果不一样，可能和蛋白本身、选择的表达载体以及荧光蛋白融合方式等有关。
为什么有的普通定位结果出来后无法准确判断其定位位置？
细胞中的细胞器复杂且多样，除一些常见的、特征比较明显的细胞器外，有些细胞器在激光共聚焦下形状比较相似，例如：线粒体、过氧化物酶体、高尔基体等细胞器，它们的荧光表达形状可能都是点状，因此不易区分。这时可以结合基因的其他功能研究来判断其可能表达的位置。另外，荧光定量，蛋白表达本身也是一个复杂的过程，涉及到多个合成场所及转运过程，自身表达情况可能比较复杂，因此不易判断具体的表达位置。
主要方法
免疫荧光技术：利用抗原与的特异性结合原理，将荧光标记的与细胞内的目标蛋白结合，然后通过荧光显微镜观察荧光信号的位置，从而确定目标蛋白的亚细胞定位。
绿色荧光蛋白（GFP）融合蛋白技术：将绿色荧光蛋白基因与目标蛋白基因融合，构建成融合蛋白表达载体。当该载体在细胞中表达时，产生的融合蛋白会带有绿色荧光，可直接通过荧光显微镜观察其在细胞内的分布，进而确定目标蛋白的亚细胞定位。
亚细胞定位是指在细胞内定位蛋白质、基因或其它分子元件的过程。通过亚细胞定位，可以了解这些物质在细胞中的具体位置、作用和相互关系。在植物细胞中，亚细胞结构包括细胞核、线粒体、叶绿体、质膜、细胞壁等。通过对洋葱细胞的亚细胞定位，可以揭示洋葱中生物活性物质在各个亚细胞结构中的分布情况。
洋葱的亚细胞定位通常采用荧光技术或绿色荧光蛋白标记技术。荧光技术是一种基于抗原-反应的定位技术，通过标记特异性，将目标物质与荧光标记结合，从而对其进行定位。绿色荧光蛋白标记技术则是一种将目标基因与绿色荧光蛋白基因融合，通过观察绿色荧光蛋白的表达情况来定位目标基因的技术。
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