





鉴别方法
(1)取该品0.1g溶于100mL水中,呈蓝色澄清溶液。
(2)该品微溶于乙醇,不溶于油脂,具有酸性染料的特性,能使动物纤维着色。
(3)100mL含有0.001g本品的0.02mol/L铵溶液的吸收波长为630±2nm。
(4)取该品水溶液,做纸上层析,其主色点的Rf值应与标准品相同。
纸上层析条件:
展开剂 ;无水乙醇;氨水(1%)=6:2:3
温 度 20~25℃
试液浓度 0.g/100mL
试液用量 2μL
展开剂前沿上升限度 160mm
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考马斯亮蓝法测定蛋白质含量流程:
该方法用于大多数蛋白质的定量是比较精que的,但不适用于小分子碱性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污剂的浓度超过0.2%影响测定结果。如TritonX-100、SDS、NP-40等。
1.Bradford浓染液的配制:将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50ml 95%乙醇,食用蓝色2号批发,加入100ml85%的磷酸,然后,用蒸馏水补充至1000ml,此染液放4℃至少6个月保持稳定。
2.标准曲线蛋白质样本的准备:尽量使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品,例如测定抗ti,可用纯化的抗ti作为标准。如果待测样本是未知的,也可用抗ti作为标准蛋白。通常在20ug—150ug/100ul之间绘制标准曲线。
3.将待测样本溶于缓冲溶液中,食用蓝色2号价格,该缓冲溶液应与制作标准曲线的缓冲溶液相同(hao用PBS)。
4.按1:5用蒸馏水稀释浓染料结合溶液,如出现沉淀,食用蓝色2号多少钱,过滤除去。
5.每个样本加5ml稀释的染料结合溶液,作用5~30min。染液与蛋白质结合后,将由红色变为蓝色,在595nm波长下测定其吸光度。注意,显色反应不得超过30min.
6.根据标准曲线计算待测样本的浓度。


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常规染色脱色方法和快速染色脱色方法的优缺点?
? 常规染色脱色方法耗时较长,但检测灵敏度更高,染色效果更加稳定。快速染色脱色方法通常检测灵敏度略低,并且在微波炉加热的过程中有时会出现暴沸导致凝胶碎裂的情况,需特别注意。另外微波炉加热导致的高温会引起染色液和脱色液中的yi酸的挥发,hao能在通风橱中进行。
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