外泌体质谱技术服务-外泌体质谱-科锐诺生物

iTRAQ (isobarictags for relative and absolute quantitation，同位素标记相对和绝1对定量)是由AB SCIEX公司研发的一种体外同重同位素标记的相对与绝1对定量技术。该技术使用8种（或4种）不同的同位素试剂来同时标记和比较8种（或4种）不同的蛋白质样品。这些试剂由3个不同的化学标签组成：报告部分，肽反应部分和平衡部分。报告部分为客户可按需选择标记个数，肽反应基团将iTRAQ标签与肽段的N-端基团和每个赖氨酸侧链相连，外泌体质谱技术服务，可标记所有酶解肽段，平衡部位可保证iTRAQ试剂标记的不同样本的同一肽段具有相同的质荷比，因此改变任一iTRAQ试剂，不同同位素在标记同一多肽后在一级质谱检测，分子量都完全相同。而在串联质谱中，同重元素标记肽段平衡基团在二级质谱发生中性丢失。信号离子表现为不同质荷比的峰，因此，根据波峰的高度及面积，可以得到蛋白质的定量信息。



外泌体的组成：外泌体主要含有融合蛋白和转运蛋白、热休1克蛋白(HSP 70)、CD类蛋白以及磷脂酶和其他脂质相关蛋白，外泌体质谱检测，但是不同来源的外泌体的组成有差异。

外泌体的提取方式：

1、离心法：此种方法得到的外泌体量多，但是纯度不足。

2、过滤离心：这种操作简单、省时，不影响外泌体的生物活性，外泌体质谱检测服务，但同样纯度不足。

3、密度梯度离心法：用此种方法分离到的外泌体纯度较高，但是前期准备工作繁杂

4、免1疫磁珠法：这种方法可以保证外泌体形态的完整，特异性高、操作简单，外泌体质谱，但生理性盐浓度会影响外泌体生物活性。

5、色谱法：此种方法分离出的外泌体大小均一，但设备特殊，应用不广泛。

抗原提呈中外泌体的作用

树突状细胞是免1疫系统中分泌外泌体活跃的细胞。树突状细胞是抗原提呈细胞的一种，能通过吞噬入1侵体内的细菌等异物，在切断抗原肽后，与 MHCⅡ类分子结合并提呈在细胞表面来激1活T细胞。细胞内的抗原肽利用MHCⅠ类分子提呈，树突状细胞分泌的外泌体携带MHCⅠ类和Ⅱ类分子，它们分别与抗原特异性CD8+ 细胞杀伤性T细胞、CD4+ 辅助T细胞的T细胞受体结合，在远离树突状细胞处也可以激1活T细胞。

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