洋葱亚细胞定位的方法包括但不限于以下三种：
荧光法：利用抗原与的特异性结合，在细胞内产生荧光标记，从而确定细胞内抗原的分布位置。
GFP融合蛋白表达法：将目的蛋白与绿色荧光蛋白(GFP)融合，通过荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达位置。
亚细胞分离法：通过一定的物理或化学方法，将细胞进行破碎，然后通过离心、密度梯度离心等方法将细胞器分离出来，再对分离出来的各个细胞器进行成分和结构分析。
亚细胞定位常见问题 细胞是构成生物体的基本结构单位和功能单位，BIFC，是生命的物质基础。细胞的结构复杂精巧且高度有序，根据功能和空间分布的不同，细胞内部可以进一步划分为不同的细胞区域或细胞器，即亚细胞，其结构只能通过电子显微镜才能观察。常见亚细胞有细胞核、细胞膜、内质网、高尔基体、细胞质、线粒体、叶绿体等。每种亚细胞中都存在一组特定的蛋白质，亚细胞结构为这些蛋白质行使功能提供了相对独立的生命活动场所。蛋白质在细胞质中经过翻译并合成，由蛋白质分选信号引导而被转运到特定的亚细胞中以参与细胞的各种生命活动，这一过程就称为蛋白质的亚细胞定位。
为什么不先对基因做预测，在预测的结果上直接做共定位？
不同的预测网站有不同的计算方法，同一个基因在不同的预测网站也可能得出不同的定位结果。另外所有的结果都应是基于实验得到的，对于不清楚可能定位在哪里的基因，一般推荐先做普通定位，根据普通定位的结果再决定做哪种细胞器的共定位。
适用于什么实验场景？
（1）基因功能研究，文章里总少不了这一项。
（2）研究蛋白相互作用，与酵母双杂实验结果相互验证。
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