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全自动酶联斑点读取分析系统(ELISPOT)的原理是什么呢
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(一)原理:细胞受到刺激后局部产生细胞因子,全自动酶联斑点读取分析系统价格,被PVDF膜上特异性单clone Antibody捕获。细胞分解后,全自动酶联斑点读取分析系统,再与生物素标记的二抗结合,其后再与碱性磷酸酶标记的亲和素结合。BCIP/NBT底物孵育后,全自动酶联斑点读取分析系统报价,PVDF膜出现“紫色”的斑点为阳性反应。
(二)ELISPOT与ELISA的区别
1.ELISA通过显色反应,在Microplate reader上测定吸光度,与标准曲线比较得出可溶性蛋白总量。
2.ELISPOT通过显色反应,在细胞分泌这种可溶性蛋白的相应位置上显现清晰可辨的斑点,可直接在显微镜下或通过仪器对斑点进行计数,1个斑点代表1个细胞,从而计算出分泌该蛋白的细胞的频率。
3.由于是单细胞水平检测,ELISPOT比ELISA和有限稀释法等更灵敏,能从20万~30万个细胞中检出1个分泌该蛋白的细胞。
4.捕获Antibody为高亲和力、高特异性和低内toxin McAb,在研究者以刺激剂activation细胞时,不会影响活化细胞分泌细胞因子。
全自动酶联斑点读取分析系统原理
将细胞置于包被有特异性Antibody的96孔板中培养,在有刺激的条件下,细胞分泌的细胞因子或免疫球蛋白会被包被Antibody捕获。移除细胞后,被capture的细胞因子可进一步使用生物素标记的二抗来标识,其后再与酶标记的亲和素作用,全自动酶联斑点读取分析系统生产厂家,并加入底物使其呈色,有反应作用的细胞会留下直径大小不等的stained spots。

1. 加入细胞到含有(或不含)刺激物中培养;
2. 阳性细胞开始分泌细胞因子,细胞因子就近被包被Antibody捕获;
3. 移出细胞,清洗板子,加入生物素标记的检测Antibody,形成“Antibody-抗原-Antibody”夹心结构;
4. 为了观察膜上斑点的形成,加入酶标记的亲和素;
5. 加入显色底物,在酶的催化分解下,生成不可溶的色素,就近沉淀在局部的膜上形成斑点;
6. 斑点计数(可用bioreader自动读板仪计数),数据处理,结果分析。
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