






禾谷菌 CgRab5A 的亚细胞定位研究:刘涵等人利用多片段一步法将 CgRab5A 自身启动子、GFP 片段和 CgRab5A 开放阅读框(ORF)片段到 pKNT 载体上,转化型禾谷菌的原生质体后,通过共聚焦显微镜观察 GFP-CgRab5A 在菌丝和孢子内的定位情况。结果表明,GFP-CgRab5A 在菌丝和孢子细胞内均呈点状分布,定位于早期内涵体上。
水稻 OsUF 的亚细胞定位:丁作美等人通过得到水稻 E3 泛素连接酶 — 泛素融合蛋白(OsUF)基因的 cDNA 序列,并利用 Gateway 同源重组体系将 OsUF cDNA 全长重组到融合表达绿色荧光蛋白(GFP)的表达载体上,通过农杆菌介导的烟草瞬时表达系统进行亚细胞定位。结果显示,OsUF 蛋白定位在细胞核。
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BiFC技术具有许多优点,例如高灵敏度、高特异性和高分辨率。它不仅可以用于研究细胞内蛋白质-蛋白质相互作用,还可以用于研究蛋白质-DNA相互作用和蛋白质-脂质相互作用。此外,BiFC技术还可以用于筛选和疾病,因为它可以快速检测出对蛋白质-蛋白质相互作用的影响。
然而,BiFC技术也存在一些局限性。例如,荧光蛋白可能会对细胞产生毒性作用,而且荧光信号的检测可能需要昂贵的仪器设备。此外,荧光蛋白的荧光信号可能会受到细胞内其他物质的干扰,从而影响结果的准确性。
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