原位杂交第三天
1） 用1ml含10％热灭清的MABT溶液置换溶液，放置摇床上25分钟，原位杂交，然后用1mlMABT置换，25分钟，再用1mlMABT溶液置换，一小时以上，后用1mlMABT溶液置换，25分钟。
2） 用1ml 1mM左旋米睉的Staining buffer洗三次，每次放置五分钟。
3）将胚胎转入十六孔板中，吸去staining buffer，加上300ul BM Purple AP Substrate(底物，用之前加5mM左旋米唑)，十六孔板外面包上锡箔纸以避光，避免摇动，染色体荧光原位杂交，室温下显色。
4）每隔一小时观察胚胎是否开始显色
5）将显色完全的胚胎中的底物吸出，用PBST洗两三次后加上4％多聚甲醛固定，拍照。
6）4C冰箱保存。
原位杂交技术在其他生物领域也有广泛的应用，植物原位杂交，例如：
动物行为学研究：在动物行为学中，原位杂交技术可以用于检测动物行为与基因表达之间的关系。例如，通过比较不同行为状态下动物脑组织中基因表达的差异，可以揭示特定基因对动物行为的影响。
生物技术应用：原位杂交技术在生物技术领域也有广泛应用，例如在基因、基因编辑和开发等方面。例如，通过原位杂交技术可以定位和特定基因，为基因和基因编辑提供基础数据和工具。
植物原位杂交在遗传育种方面的应用主要包括：
检测物种或品种特异性：通过植物原位杂交技术可以检测出不同物种或品种之间基因表达的差异，从而为物种或品种特异性研究提供依据。
遗传育种：通过植物原位杂交技术可以检测到不同品种之间基因表达的差异，荧光原位杂交，从而为遗传育种提供重要的参考信息。例如，通过将特定的外源基因导入到植物细胞中，然后利用原位杂交技术检测该基因在植物细胞中的位置和表达情况，为遗传育种提供重要的参考信息。
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