生化标志物（蛋白 / 核酸 / 脂质）
蛋白标志物：
植物特有：TET8、PEN1、SYP121、HSP70等膜转运 / 热激蛋白。
通用：CD63/CD9/TSG101交叉反应弱，外泌体检测服务，不推荐；优先 WB + 质谱。
核酸：小 RNA 测序、qPCR 检测 miRNA/sRNA；外泌体富集特定 RNA。
脂质：磷脂、鞘脂、胆固醇；质谱分析脂质组。
二、纯度与完整性检测
BCA+NTA：计算粒子 / 蛋白比（particles/mg），比值越高纯度越好。
Triton X?100 破膜实验：验证膜结构完整性；破膜后 NTA 颗粒数显著下降。
排除污染：检测叶绿体 / 线粒体标志物、多糖、多酚、果胶（植物样本易污染）。
外泌体电镜是纳米级外泌体（直径通常 30–150 nm）形态鉴定与结构分析的技术，主流为透射电镜（TEM，含负染、超薄切片）、冷冻透射电镜（Cryo-TEM），辅以扫描电镜（SEM）和电子断层扫描（ET），是外泌体 “金标准” 鉴定方法之一（常与 NTA、Western blot 联用）。
常用技术与流程
负染 TEM（常规）
原理：用 2% 磷钨酸（PTA，pH 6.5–7.0）或醋酸双氧铀染背景，样品本身不被强染，形成亮边暗中心的反差，清晰显示双层膜与杯状 / 茶托形态。
流程：碳支持膜铜网滴样（5–10 μL，静置 10 min 吸附）→ 滤纸侧吸余液 → 负染 1–2 min → 吸干晾干 → 80–120 kV、50k–100k 倍观察。
优点：快速、成本低、样品需求量小；缺点：化学染色可能轻微改变结构，盐结晶易干扰。
外泌体作为细胞分泌的纳米级脂质双层膜囊泡，广泛参与细胞间通讯、物质运输及信号传递，在生理病理过程中发挥关键作用，其形态学特征、结构完整性及功能关联性的研究已成为生命科学、医学诊断及研发领域的热点方向。电子显微镜（简称电镜）技术凭借其纳米级的超高分辨率，能够直观呈现外泌体的大小、形态、膜结构及内部成分，是外泌体鉴定、表征及机制研究的工具。
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