冷冻 TEM（近天然结构）
原理：样品快速浸入液态玻璃化，外泌体检测公司，全程无化学固定 / 脱水 / 染色，在液氮低温下成像，可观察真实双层膜、内容物，适合高分辨率结构研究。
流程：3 μL 样品滴多孔碳网 → 滤纸轻吸成薄水膜 → 液态冷冻 → 液氮转移至电镜冷台（-170℃以下）成像；冷冻断层扫描（cryo-ET）可重构 3D 结构。
优点：结构保真度极高；缺点：设备昂贵、操作复杂。
超薄切片 TEM
用于细胞内 / 组织中外泌体定位，或观察群体分布；流程： + 双固定 → 梯度脱水 → 环氧树脂包埋 → 切片机切成 40–90 nm 薄片 → 醋酸铀 + 柠檬酸铅染色 → TEM 观察。
外泌体的研究离不开的表征技术，其中形态学鉴定是外泌体研究的基础前提。由于外泌体尺寸微小（远低于光学显微镜的分辨率极限），传统光学显微镜无法清晰呈现其形态和结构，而电子显微镜技术凭借电子束的短波长特性，分辨率可达到纳米级别，能够直观、清晰地展示外泌体的超微结构，成为外泌体形态学鉴定的“金标准”。目前，用于外泌体研究的电镜技术主要包括透射电子显微镜（Transmission Electron Microscopy， TEM）、扫描电子显微镜（Scanning Electron Microscopy， SEM）、冷冻透射电子显微镜（Cryo-Transmission Electron Microscopy， Cryo-TEM）、电子断层扫描（Electron Tomography， ET）及免疫电镜等，各类技术各具特色，分别适用于不同的研究需求，共同推动了外泌体研究的深入发展。
生化标志物（蛋白 / 核酸 / 脂质）
蛋白标志物：
植物特有：TET8、PEN1、SYP121、HSP70等膜转运 / 热激蛋白。
通用：CD63/CD9/TSG101交叉反应弱，不推荐；优先 WB + 质谱。
核酸：小 RNA 测序、qPCR 检测 miRNA/sRNA；外泌体富集特定 RNA。
脂质：磷脂、鞘脂、胆固醇；质谱分析脂质组。
二、纯度与完整性检测
BCA+NTA：计算粒子 / 蛋白比（particles/mg），比值越高纯度越好。
Triton X?100 破膜实验：验证膜结构完整性；破膜后 NTA 颗粒数显著下降。
排除污染：检测叶绿体 / 线粒体标志物、多糖、多酚、果胶（植物样本易污染）。
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