生化标志物（蛋白 / 核酸 / 脂质）
蛋白标志物：
植物特有：TET8、PEN1、SYP121、HSP70等膜转运 / 热激蛋白。
通用：CD63/CD9/TSG101交叉反应弱，不推荐；优先 WB + 质谱。
核酸：小 RNA 测序、qPCR 检测 miRNA/sRNA；外泌体富集特定 RNA。
脂质：磷脂、鞘脂、胆固醇；质谱分析脂质组。
二、纯度与完整性检测
BCA+NTA：计算粒子 / 蛋白比（particles/mg），比值越高纯度越好。
Triton X?100 破膜实验：验证膜结构完整性；破膜后 NTA 颗粒数显著下降。
排除污染：检测叶绿体 / 线粒体标志物、多糖、多酚、果胶（植物样本易污染）。
外泌体的典型形态为球形或类球形，部分情况下可呈现出盘状、杯状或不规则形态，这与样本制备过程（如干燥、染色）及外泌体的自身状态密切相关——例如，电镜下常见的“茶杯状”外泌体，实际上是干燥过程中囊泡瘪塌形成的假象，而非其天然形态，但这种形态已成为外泌体形态学鉴定的公认特征之一。外泌体的结构是脂质双层膜，其膜成分与细胞膜相似，主要包括磷脂、胆固醇、鞘脂等，同时膜表面还富含多种蛋白质，如四跨膜蛋白（CD9、CD63、CD81）、整合素、黏附分子等，这些蛋白质不仅参与外泌体的形成和释放，还能介导外泌体与的识别和结合，是外泌体亚型鉴定的重要标志物。
外泌体的尺寸微小（30~150 nm），动物外泌体检测，传统光学显微镜无法清晰呈现其形态和结构，而电子显微镜技术通过电子束替代可见光，利用电子的波动性和粒子性，实现了纳米级的分辨率，能够直观、清晰地展示外泌体的超微结构，是外泌体形态学鉴定和结构分析的工具。目前，用于外泌体研究的电镜技术主要包括透射电镜、扫描电镜、冷冻透射电镜、电子断层扫描及免疫电镜等，各类技术的原理、特点及应用场景存在显著差异，下面分别进行详细阐述。
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