主流电镜技术与流程
传统透射电镜（负染 TEM，常用）
样品制备：纯化外泌体悬液（离心 + 0.22 μm 过滤），滴至 Formvar / 碳膜铜网吸附（5–30 min）；2% 预固定，再用 1–2% 醋酸铀（UA）或 2% 磷钨酸（PTA，pH 6.5–7.0）负染（0.5–2 min），吸干后室温干燥。
成像参数：加速电压 80–120 kV，放大倍数 50，000–100，000×，低剂量模式避免样品损伤。
典型图像：双层膜清晰，呈亮边暗背景的杯状 / 圆形，外泌体NTA检测，直径符合 30–150 nm 范围；盐结晶为规则几何形、细胞碎片不规则，需排除。
扫描电子显微镜与TEM的区别在于，其电子束不穿透样品，而是通过电子束在样品表面进行扫描，电子与样品表面的原子发生相互作用，产生二次电子、背散射电子等信号，这些信号经探测器收集、放大后，在成像屏幕上形成样品的三维表面形貌图像。SEM的分辨率通常为1~10 nm，虽然低于TEM，但能够清晰呈现外泌体的表面形貌、大小及分布状态，同时还能观察外泌体与载体表面或的相互作用，为外泌体的表面特征研究提供支持。
植物外泌体（植物源外泌体样纳米颗粒，PELNs）检测以形态、粒径、浓度、生化组成、纯度为，优先用TEM+NTA+WB / 质谱组合鉴定，再做功能与质控检测。
一、鉴定三要素（ISEV 标准）
1. 形态学观察（TEM/SEM/AFM）
透射电镜（TEM）：金标准，可见双层膜、杯状 / 茶托状、近球形结构，粒径 30–150 nm。
扫描电镜（SEM）：看表面形貌与分散性。
原子力显微镜（AFM）：测三维形貌与膜厚度。
2. 粒径与浓度（NTA/DLS）
纳米颗粒跟踪分析（NTA）：单颗粒，给出粒径分布（30–150 nm 为主）、浓度、多分散性，适合复杂样本。
动态光散射（DLS）：测平均粒径与 PDI，适合单分散体系，不能替代 NTA。
合格参考：主峰 30–150 nm，浓度≥1×10? particles/mL。
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