免疫 TEM
结合胶体金标记的特异性（如 CD63、CD9），可在电镜下直接定位外泌体表面标志物，实现形态与分子特征的同步验证。
SEM
聚焦样品表面形貌，需喷金导电处理；分辨率略低于 TEM，多用于观察外泌体在材料 / 细胞表面的附着形态，而非内部精细结构。
关键质控与判读要点
典型外泌体：30–150 nm，双层膜，常呈杯状；无膜的球形颗粒多为脂蛋白 / 蛋白聚集体；盐结晶呈规则几何状，外泌体检测服务，需区分。
样品浓度需合适（推荐≥10? particles/mL），过浓重叠、过稀难寻；PTA 的 pH 必须接近中性，避免膜损伤。
观察用低剂量模式，减少电子束对样品的辐照损伤。
与扫描电镜不同，TEM需要将样品制备成超薄切片（厚度通常为50~100 nm）或直接将纳米级样品吸附在载样网上，确保电子束能够穿透样品。对于外泌体样品，通常采用负染法或正染法进行染色处理，以增强样品与背景的对比度，便于观察外泌体的形态和结构——负染法是利用高电子密度的重金属盐（如磷钨酸、醋酸铀）包裹外泌体表面，使背景呈现深色，外泌体呈现亮白色的“亮核暗晕”形态；正染法则是让重金属盐渗透到外泌体内部，使外泌体呈现深色的“暗核亮背景”形态，两种染色方法各有优势，可根据研究需求选择使用。
外泌体电镜是纳米级外泌体（直径通常 30–150 nm）形态鉴定与结构分析的技术，主流为透射电镜（TEM，含负染、超薄切片）、冷冻透射电镜（Cryo-TEM），辅以扫描电镜（SEM）和电子断层扫描（ET），是外泌体 “金标准” 鉴定方法之一（常与 NTA、Western blot 联用）。
常用技术与流程
负染 TEM（常规）
原理：用 2% 磷钨酸（PTA，pH 6.5–7.0）或醋酸双氧铀染背景，样品本身不被强染，形成亮边暗中心的反差，清晰显示双层膜与杯状 / 茶托形态。
流程：碳支持膜铜网滴样（5–10 μL，静置 10 min 吸附）→ 滤纸侧吸余液 → 负染 1–2 min → 吸干晾干 → 80–120 kV、50k–100k 倍观察。
优点：快速、成本低、样品需求量小；缺点：化学染色可能轻微改变结构，盐结晶易干扰。
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