






生化标志物(蛋白 / 核酸 / 脂质)
蛋白标志物:
植物特有:TET8、PEN1、SYP121、HSP70等膜转运 / 热激蛋白。
通用:CD63/CD9/TSG101交叉反应弱,不推荐;优先 WB + 质谱。
核酸:小 RNA 测序、qPCR 检测 miRNA/sRNA;外泌体富集特定 RNA。
脂质:磷脂、鞘脂、胆固醇;质谱分析脂质组。
二、纯度与完整性检测
BCA+NTA:计算粒子 / 蛋白比(particles/mg),外泌体免疫电镜,比值越高纯度越好。
Triton X?100 破膜实验:验证膜结构完整性;破膜后 NTA 颗粒数显著下降。
排除污染:检测叶绿体 / 线粒体标志物、多糖、多酚、果胶(植物样本易污染)。
外泌体的功能是参与细胞间通讯,通过携带的生物活性分子,在细胞与细胞之间、组织与组织之间传递信号,调控的生理功能和病理状态。具体而言,其生物学功能主要体现在以下几个方面:一是免疫调节功能。免疫细胞(如巨噬细胞、T细胞、B细胞)分泌的外泌体能够携带抗原、、免疫受体等分子,参与免疫细胞的活化、增殖和分化,调节机体的免疫应答。例如,巨噬细胞分泌的外泌体可携带因子,促进反应的发生;T细胞分泌的外泌体则能够细胞的增殖,发挥免疫作用。

标准检测流程(推荐)
样本前处理:收集质外体液 / 汁液,过滤(0.45/0.22 μm),去多糖 / 多酚 / 果胶。
分离纯化:差速离心→密度梯度离心 / 尺寸排阻 / 超滤→浓缩。
鉴定:
TEM:形态 + 粒径
NTA:粒径分布 + 浓度
WB / 质谱:标志蛋白
核酸 / 脂质分析
纯度验证:粒子 / 蛋白比、破膜实验、污染标志物检测。
功能验证:细胞摄取、活性、 / 抗病等。
五、质控与合规(如 FDA DMF)
纯度、粒径 / 浓度、形态、蛋白 / 核酸 / 脂质组成、稳定性、生物活性、安全性(细胞毒性)、抗原性。
植物外泌体检测难点
植物样本含大量多糖、多酚、果胶、细胞壁碎片,易共沉淀,干扰检测。
缺乏广谱、高特异性植物外泌体,标志物鉴定受限。
提取量极低(1 kg 样本≈μg 级),需高灵敏度方法。
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