






植物外泌体(植物源外泌体样纳米颗粒,PELNs)检测以形态、粒径、浓度、生化组成、纯度为,动植物外泌体,优先用TEM+NTA+WB / 质谱组合鉴定,再做功能与质控检测。
一、鉴定三要素(ISEV 标准)
1. 形态学观察(TEM/SEM/AFM)
透射电镜(TEM):金标准,可见双层膜、杯状 / 茶托状、近球形结构,粒径 30–150 nm。
扫描电镜(SEM):看表面形貌与分散性。
原子力显微镜(AFM):测三维形貌与膜厚度。
2. 粒径与浓度(NTA/DLS)
纳米颗粒跟踪分析(NTA):单颗粒,给出粒径分布(30–150 nm 为主)、浓度、多分散性,适合复杂样本。
动态光散射(DLS):测平均粒径与 PDI,适合单分散体系,不能替代 NTA。
合格参考:主峰 30–150 nm,浓度≥1×10? particles/mL。
外泌体的研究离不开的表征技术,其中形态学鉴定是外泌体研究的基础前提。由于外泌体尺寸微小(远低于光学显微镜的分辨率极限),传统光学显微镜无法清晰呈现其形态和结构,而电子显微镜技术凭借电子束的短波长特性,分辨率可达到纳米级别,能够直观、清晰地展示外泌体的超微结构,成为外泌体形态学鉴定的“金标准”。目前,用于外泌体研究的电镜技术主要包括透射电子显微镜(Transmission Electron Microscopy, TEM)、扫描电子显微镜(Scanning Electron Microscopy, SEM)、冷冻透射电子显微镜(Cryo-Transmission Electron Microscopy, Cryo-TEM)、电子断层扫描(Electron Tomography, ET)及免疫电镜等,各类技术各具特色,分别适用于不同的研究需求,共同推动了外泌体研究的深入发展。

生化标志物(蛋白 / 核酸 / 脂质)
蛋白标志物:
植物特有:TET8、PEN1、SYP121、HSP70等膜转运 / 热激蛋白。
通用:CD63/CD9/TSG101交叉反应弱,不推荐;优先 WB + 质谱。
核酸:小 RNA 测序、qPCR 检测 miRNA/sRNA;外泌体富集特定 RNA。
脂质:磷脂、鞘脂、胆固醇;质谱分析脂质组。
二、纯度与完整性检测
BCA+NTA:计算粒子 / 蛋白比(particles/mg),比值越高纯度越好。
Triton X?100 破膜实验:验证膜结构完整性;破膜后 NTA 颗粒数显著下降。
排除污染:检测叶绿体 / 线粒体标志物、多糖、多酚、果胶(植物样本易污染)。
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