免疫 TEM
结合胶体金标记的特异性（如 CD63、CD9），可在电镜下直接定位外泌体表面标志物，实现形态与分子特征的同步验证。
SEM
聚焦样品表面形貌，需喷金导电处理；分辨率略低于 TEM，外泌体检测服务，多用于观察外泌体在材料 / 细胞表面的附着形态，而非内部精细结构。
关键质控与判读要点
典型外泌体：30–150 nm，双层膜，常呈杯状；无膜的球形颗粒多为脂蛋白 / 蛋白聚集体；盐结晶呈规则几何状，需区分。
样品浓度需合适（推荐≥10? particles/mL），过浓重叠、过稀难寻；PTA 的 pH 必须接近中性，避免膜损伤。
观察用低剂量模式，减少电子束对样品的辐照损伤。
标志性分子检测是外泌体鉴定的，ISEV推荐检测的阳性标志物包括跨膜蛋白CD63、CD9、CD81，溶质蛋白TSG101、Alix等，同时需检测Calnexin等阴性标志物，排除杂质干扰。常用检测方法包括Western Blot（WB）与流式细胞术：WB通过电泳分离、转膜、孵育等步骤，检测特定蛋白条带，可验证标志物的存在，但操作繁琐、灵敏度较低；流式细胞术借助荧光标记与外泌体表面抗原结合，可快速、定量检测表面标志物表达，确定外泌体纯度与数量，但对样本纯度要求较高，易出现假阳性结果。
外泌体电镜的标准操作流程：
样品制备（超离后/色谱后样本的稀释、上样技巧）。
负染步骤详解（醋酸双氧铀 vs. 磷钨酸的选择、浓度、时间、注意事项）。
制样常见陷阱（如何避免“盐结晶”、样品聚集、染色沉淀）。
关键图谱解读与陷阱分析：
外泌体的典型形态（“杯状结构”的成因与争议）。
如何区分外泌体、微囊泡、脂蛋白、蛋白聚合物。
常见假象（箭头指向关键特征，解释其成因）。
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