外泌体检测浓度-武汉贝科新肽公司(图)

外泌体分离纯化是检测的前提，目标是从复杂体液中分离出高纯度、高活性的外泌体，去除蛋白质、脂质复合物等杂质干扰。目前常用的分离纯化技术主要包括以下几种：离心法是外泌体分离的“金标准”，通过不同转速的离心步骤，逐步去除细胞碎片、大囊泡等杂质，终获得外泌体，该方法纯度较高，但操作繁琐、耗时较长，且可能导致外泌体结构破坏，不利于后续活性分析与内容物提取。密度梯度离心法在离心的基础上加入密度介质，通过密度差异实现外泌体的分离，纯度优于普通离心法，外泌体检测浓度，但同样存在操作复杂、通量低的问题。

外泌体电镜是纳米级外泌体（直径通常 30–150 nm）形态鉴定与结构分析的技术，主流为透射电镜（TEM，含负染、超薄切片）、冷冻透射电镜（Cryo-TEM），辅以扫描电镜（SEM）和电子断层扫描（ET），是外泌体 “金标准” 鉴定方法之一（常与 NTA、Western blot 联用）。

常用技术与流程

负染 TEM（常规）

原理：用 2% 磷钨酸（PTA，pH 6.5–7.0）或醋酸双氧铀染背景，样品本身不被强染，形成亮边暗中心的反差，清晰显示双层膜与杯状 / 茶托形态。

流程：碳支持膜铜网滴样（5–10 μL，静置 10 min 吸附）→ 滤纸侧吸余液 → 负染 1–2 min → 吸干晾干 → 80–120 kV、50k–100k 倍观察。

优点：快速、成本低、样品需求量小；缺点：化学染色可能轻微改变结构，盐结晶易干扰。

外泌体的生成是一个复杂的细胞内过程，主要涉及内吞、多囊泡体形成及释放三个关键步骤。首先，细胞通过内吞作用将胞外物质或细胞膜成分摄入细胞内，形成早期内体；随后，早期内体的膜结构发生内陷，形成包含多个小囊泡的多囊泡体（Multivesicular Bodies， MVBs）；后，多囊泡体与细胞膜融合，将其内部的小囊泡释放到细胞外，这些被释放的小囊泡即为外泌体。


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