生化标志物（蛋白 / 核酸 / 脂质）
蛋白标志物：
植物特有：TET8、PEN1、SYP121、HSP70等膜转运 / 热激蛋白。
通用：CD63/CD9/TSG101交叉反应弱，外泌体检测服务，不推荐；优先 WB + 质谱。
核酸：小 RNA 测序、qPCR 检测 miRNA/sRNA；外泌体富集特定 RNA。
脂质：磷脂、鞘脂、胆固醇；质谱分析脂质组。
二、纯度与完整性检测
BCA+NTA：计算粒子 / 蛋白比（particles/mg），比值越高纯度越好。
Triton X?100 破膜实验：验证膜结构完整性；破膜后 NTA 颗粒数显著下降。
排除污染：检测叶绿体 / 线粒体标志物、多糖、多酚、果胶（植物样本易污染）。
免疫电镜（Immuno-TEM）结合胶体金标记的特异性，定位外泌体表面 / 内部蛋白（如 CD63、CD81、TSG101），用于外泌体亚群鉴定与功能验证。
关键问题与质控
背景过深 / 颗粒聚集：多为染色时间过长、样品浓度过高或盐未洗净；优化染色时长、稀释样品、增加超纯水漂洗步骤。
无典型膜结构：可能是蛋白聚集体或脂蛋白；结合 NTA 粒径分析、Western blot（检测外泌体标志蛋白）联合鉴定。
重复性：需拍摄 10 个以上不同视野，统计粒径分布与形态比例。
应用场景
外泌体的形态学鉴定（区分外泌体与微囊泡、凋亡小体）；
疾病标志物研究（如来源外泌体的形态变化）；
外泌体载药 / 工程化后的结构表征；
外泌体与细胞 / 材料相互作用的超微观察。
一、一句话区别
TEM（透射电镜）：看内部、看膜结构、看典型外泌体形貌 → 外泌体鉴定金标准
SEM（扫描电镜：看表面、看立体形貌、看分布 → 辅助观察，不做主鉴定
二、关键区别（外泌体版）
1. 看什么不一样
TEM（透射）
电子穿透样品
看到：膜结构、双层膜、杯状 / 茶托状、大小均一性
能直接判断：这是不是外泌体
典型图：一个个圆盘 / 杯状小囊泡
SEM（扫描）
电子只扫表面
看到：3D 立体表面、颗粒圆润度、分布密度
看不到内部膜结构
典型图：一堆小圆球堆在一起
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