生化标志物（蛋白 / 核酸 / 脂质）
蛋白标志物：
植物特有：TET8、PEN1、SYP121、HSP70等膜转运 / 热激蛋白。
通用：CD63/CD9/TSG101交叉反应弱，动植物外泌体，不推荐；优先 WB + 质谱。
核酸：小 RNA 测序、qPCR 检测 miRNA/sRNA；外泌体富集特定 RNA。
脂质：磷脂、鞘脂、胆固醇；质谱分析脂质组。
二、纯度与完整性检测
BCA+NTA：计算粒子 / 蛋白比（particles/mg），比值越高纯度越好。
Triton X?100 破膜实验：验证膜结构完整性；破膜后 NTA 颗粒数显著下降。
排除污染：检测叶绿体 / 线粒体标志物、多糖、多酚、果胶（植物样本易污染）。
植物外泌体检测的功能，主要是鉴定它是什么、有什么活性、能不能用，分成基础鉴定功能和应用验证功能两大类。
一、基础鉴定功能（判断 “是不是、纯不纯”）
确认是植物外泌体
看形态：双层膜、30–150 nm 纳米颗粒
看粒径与浓度：NTA/DLS 测大小、数量
看标志物：植物膜蛋白、小 RNA、特征脂质
评估纯度与质量
排除多糖、多酚、细胞壁碎片、叶绿体 / 线粒体污染
计算颗粒 / 蛋白比，判断纯化效果
验证膜完整性（破膜实验）
稳定性检测
不同温度、pH、冻融循环下粒径、浓度、结构变化
为储存、制剂、工艺提供依据
标准检测流程（推荐）
样本前处理：收集质外体液 / 汁液，过滤（0.45/0.22 μm），去多糖 / 多酚 / 果胶。
分离纯化：差速离心→密度梯度离心 / 尺寸排阻 / 超滤→浓缩。
鉴定：
TEM：形态 + 粒径
NTA：粒径分布 + 浓度
WB / 质谱：标志蛋白
核酸 / 脂质分析
纯度验证：粒子 / 蛋白比、破膜实验、污染标志物检测。
功能验证：细胞摄取、活性、 / 抗病等。
五、质控与合规（如 FDA DMF）
纯度、粒径 / 浓度、形态、蛋白 / 核酸 / 脂质组成、稳定性、生物活性、安全性（细胞毒性）、抗原性。
植物外泌体检测难点
植物样本含大量多糖、多酚、果胶、细胞壁碎片，易共沉淀，干扰检测。
缺乏广谱、高特异性植物外泌体，标志物鉴定受限。
提取量极低（1 kg 样本≈μg 级），需高灵敏度方法。
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