






根癌农杆菌Ti质粒上的T-DNA片段可在Vir毒蛋白下,自主切割、转移并整合至植物基因组。科研中已去除Ti质粒的致瘤基因,改造为安全的二元载体、超二元载体或三元载体系统,芒果组培技术,将目的基因插入T-DNA区域,借助农杆菌侵染实现外源基因的定向递送与整合。常用农杆菌菌株包括EHA105、AGL-1、LBA4404等,适配玉米幼胚侵染体系。
主要以玉米未成熟合子胚(IZEs)为受体,该材料分裂能力强、再生;近年也开发出成熟种子胚外植体转化体系,可规避幼胚取材受生育期限制的问题,实现周年转化。
优点:外源基因多为单拷贝或低拷贝整合,基因沉默概率低,植株性状稳定、遗传重复性好,适合商业化品种培育;操作成本低、载体体系成熟。缺点:传统体系基因型依赖性极强,多数玉米骨干自交系转化效率极低;侵染、共培养条件严苛,实验容错率低。
基因轰击法(微粒轰击法)1990年成功应用于玉米植株创制,是早实现玉米商业化转化的技术,属于纯物理转化方式,不依赖生物载体。
农杆菌侵染与共培养将活化的农杆菌菌液调配至适宜OD值,将筛选后的胚性愈伤浸入菌液浸泡侵染,适度震荡保证菌液充分附着;捞出愈伤吸干表面多余菌液,接种于共培养基,25℃避光暗培养2–3天,完成T-DNA的转移与基因组整合。4. 抗性筛选与愈伤继代共培养结束后,用无菌水洗脱愈伤表面残留农杆菌,吸干水分后转入含对应筛选剂的筛选培养基,28℃避光培养。经过2–3轮继代筛选,淘汰未转化的阴性愈伤,获得增殖状态良好的抗性阳性愈伤组织。
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